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血红素铁酸性丙酮提取法
2022-05-19

血红素铁酸性丙酮提取法:使用酸性丙酮分离提取血红素铁的方法。
原理:血液中的血红蛋白是由4分子亚铁血红素和1分子珠蛋白结合而成的。在pH> 3时,亚铁血红素与珠蛋白结合最疏松。根据此化学性质,提取时先从血液中分离出血液,然后加水将血球液溶解,调节pH至3.0左右,加入适量丙酮,可使蛋白质凝固,亚铁血红素则溶于丙酮液中。再加入醋酸钠,鞣酸,稀碱或直接蒸馏,即可使血红素铁沉淀析出。
工艺:红细胞加适量水,进行机械搅拌细胞破碎30 min后,加入红细胞5倍体积的3%的酸性丙酮溶液,用1 mol/L的盐酸调溶液的pH至2~3,抽提10 min,离心收集上清液,加入1 mol/L的氢氧化钠,待进一步提取,提取方法有以下4种:
1、醋酸钠法:加滤液量1%的醋酸钠搅拌均匀,静止,抽滤,取沉淀,用蒸馏水,无水乙醇,乙醚依次冲洗2次,除去杂质,干燥,回收丙酮;
2、蒸馏法:水浴回收丙酮,滤液浓缩后即产生沉淀,抽滤,干燥得到血红素铁成品;
3、稀碱抽提法:将酸性丙酮和血球混合液抽滤,滤液用酸性丙酮洗至浅灰色,合并滤液,用1mol/LNaOH溶液调pH至中性,析出沉淀,离心,取沉淀,用0.1 mol/L NaOH溶液溶解后离心,,取上清液,用1 mol/LHCl调pH至酸性,析出大量沉淀,离心,水洗沉淀3次至中性,干燥,得到血红素铁;
4、鞣酸盐析法:向提取液中加入5%的鞣酸,搅匀静置过夜,氯化血红素呈针状晶体析出,,离心收集沉淀,用蒸馏水洗涤3次,干燥后获得氯化血红素。

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